1、试剂配制及保存

缓冲剂 6包 每包加510mL蒸馏水或纯净水溶解,常温存放。

显色剂 3瓶 每瓶加10.5mL缓冲液溶解，4℃冰箱保存，每份加100μL。

底 物 10瓶 每瓶加3.1mL蒸馏水或纯净水溶解，4℃冰箱保存，每份加100μL。

胆碱酯酶 10瓶 不用配制，直接取用 4℃冰箱保存，每份加100μL。

酶活力 空白对照1分钟吸光度变化值(ΔΑ0)在0.15-0.3之间。

2、样品提取

取2g果蔬样品（块茎类取4g）剪成1cm左右见方碎片，放入小烧杯（或取样瓶）中；加入10mL缓冲液，振荡1～2min，倒出提取液，静置2min待测。

3、测试

对照测试：于专用反应瓶中加入2.5mL缓冲液，再分别加入100μL显色剂和酶液，混匀，37℃下放置15min后加入100μL底物，摇匀并立即倒入比色杯中，放入测试通道，按仪器“对照”键测试3min的吸光度变值ΔΑ0。

样品测试：于专用反应瓶中加入2.5mL待测样品液，再分别加入100μL显色剂和酶液，混匀，37℃下放置15min后加入100μL底物，摇匀并立即倒入比色杯中，放入测试通道，按仪器“样品”键，测试3min的吸光度变化值ΔΑt。

结果判定：

◇ 以分光光度计测试时，按以下表达式计算出抑制率： 抑制率(%)=[(ΔΑ0－ΔΑt)/ΔΑ0]×100

◇ 以农残检测仪检测时其抑制率一般可自动计算。若样品抑制率≥50%，表示被测果蔬农残超标，为阳性结果。阳性结果的样品需做2次以上重复检测，多次检测仍呈阳性需用气相色谱等仪器做进一步确认。

操作提示：

在加底物的环节中，可预先将底物加入比色杯，待静置时间一到，马上将反应瓶中的反应液倒入已经加有底物的比色杯，并迅速放入测试通道进行测试。这样可以减少同时检测多个样品时因加底物时间过长而造成的误差。

4、注意事项

酶活性要求：本试剂盒中酶试剂正常活性ΔΑ0≥0.3，符合GB/T 5009.199-2003方法的要求。

保存：试剂盒应保存4℃冰箱，保质期12个月。

使用：任何试剂使用时，用一瓶打开一瓶，用完后才使用新的，防止变质。

器具专用原则：任何用于移液的器具和容器都应各自贴上标签，单独使用，以免交叉污染。

试剂只出不入原则：测试时，从任何试剂瓶吸出的试剂，禁止再次注射回试剂瓶。

环境温度对测试的影响：当环境温度过低时（一般低于20℃）,测试时需作必要保温措施。

常温方法：本试剂可用常温方法测试，测试时试剂室温放置10min，测试1min的吸光度变化值ΔΑ0。正常活性ΔΑ0在0.15～0.3之间。