细胞简介：
人肺微血管内皮细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。
肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之
外窍。微血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。细胞呈梭形或多角形，
形成单层后呈鹅卵石样或铺路石样排列。肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障，该屏障对于肺气体交换，调节
液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。

方法简介 实验室分离的人肺微血管内皮细胞采用组织贴块法并结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，

细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的人肺微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、
HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

自备试剂： 0.25%胰蛋白酶 、多聚-L-赖氨酸溶液（1×）或多聚-L-赖氨酸溶液
（10×）或明胶包被液（1 mg/mL）、PBS  、完全培养基 

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 人肺微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等) (CM-H001)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人肺微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证
该细胞的**培养状态

培养操作步骤：

一、细胞复苏‌：

将冻存管在37℃水浴中快速解冻，加入4mL培养基混合。

1000rpm离心5分钟，弃上清，用1-2mL培养基重悬后接种至培养瓶，37℃培养过夜。

‌二、细胞传代‌：

‌准备‌：当细胞达80%-90%汇合度时，弃原培养液，用PBS润洗1-2次。

‌消化‌：加入0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化液，37℃孵育1-2分钟，显微镜下观察至细胞变圆脱落。

‌终止与收集‌：加入含血清培养基终止消化，吹打细胞至悬液，1000rpm离心5分钟，重悬后按1:2比例分瓶。

三、细胞冻存‌：

待细胞状态良好时，用90%胎牛血清+10% DMSO的冻存液重悬细胞。

分装至冻存管，液氮长期保存。
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实验方法：

一、实验材料

‌组织样本‌：手术切除的正常肺组织。

‌消化酶‌：0.05%胰蛋白酶/0.5mmol/L EDTA，或2g/LⅠ型/Ⅱ型胶原酶。

‌培养基‌：含20%胎牛血清、4mmol/L谷氨酰胺、90U/ml肝素和100μg/ml链霉素的DME
M培养液。

‌培养器皿‌：用多聚赖氨酸包被的6孔培养板，15ml/50ml离心管。

‌工具‌：手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪、眼科镊。

二、实验步骤

‌1、组织处理‌：

将肺组织置于无菌培养皿中，用含双抗的1×PBS(pH=7.4)清洗至无明显血细胞。

剪取肺组织边缘微血管丰富的组织，用含双抗的1×PBS(pH=7.4)清洗两次。

将剪取的肺边缘组织剪成2-3mm³大小，加入含双抗的1×PBS(pH=7.4)清洗。

‌2、消化与分离‌：

用灭菌处理的玻璃滴管将剪碎的组织块和清洗用的1×PBS(pH=7.4)混合，进行消化。

消化后的组织悬液用血清终止酶活性，并通过200目的金属筛去除未消化组织。

‌3、原代培养‌：

将消化后的组织块接种到培养瓶内，倒置于37℃、5%CO₂的培养箱中，使组织贴壁20min。

沿培养瓶侧壁轻轻加入少许DME M培养液（含20%胎牛血清、4mmol/L谷氨酰胺、90U/ml肝素、100IU/ml
青霉素和100μg/ml链霉素），以刚没过植块为宜。

正置放入培养箱中继续培养2h，观察植块贴壁和血细胞迁出情况。

4‌、传代培养‌：

细胞长满瓶壁的80%左右时进行传代。

弃原培养液，加D-Hank′s液清洗两次后加少许0.125%胰蛋白酶和0.01%EDTA的混合消化液，待细胞收缩变圆、
细胞间隙增宽时，立即加入含20%胎牛血清的DME M培养液终止消化。

用弯头吸管把细胞轻轻吹打下来，移至无菌离心管内，1000r/min离心5min，弃上清，加少许DME M培养液
（含20%胎牛血清）将细胞轻轻吹散制成悬液，按1:2比例传代并补足培养液。