一步式RT-PCR Mix实验注意事项：

1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；

2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；

3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。

4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

产品名称：一步式RT-PCR Mix

英文名称：详见说明书

编号：

分类：PCR检测试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光。

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                   微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                   毫升

产品说明书                                   1份

它具有下列特点：

1. 一管式操作，用户只需要提供样品即可。

2. 根据大豆热休克蛋白基因保守区域设计引物，能专一性检测出样品中的大豆成分，但不能检测其他非大豆成分。

3. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。

4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪，无需配置贵重仪器设备。

5. 对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.1%，对样品中大豆成分的核酸检测下限为 1.0ng/μL。

6. 本只能用于科研，足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。

NNT  烟酰胺核苷酸转氢酶抗体紫杉叶素  

Nociceptin  孤菲肽/痛敏肽抗体紫云英苷

Nociceptin receptor  孤菲肽受体/痛敏肽受体抗体祖师麻甲素(瑞香素）  

Nogo R  轴索过度生长抑制因子受体/Nogo受体抗体醉椒素

Nogo-A  轴索过度生长抑制因子-A抗体左旋千金藤啶碱

Nogo-B/A  轴索过度生长抑制因子-B/A抗体1,5-二咖啡酰奎宁酸

nNos/NOS-1  一氧化氮合成酶-1抗体（神经型）1,8-二羟基葸醌

NOS-2/iNOS  一氧化氮合成酶-2抗体（诱导型）10-姜酚

NOS-2/iNOS  一氧化氮合成酶-2抗体（诱导型）10-羟基喜树碱

NOS-3/eNOS  一氧化氮合成酶-3抗体（内皮型）10-脱乙酰基巴卡丁Ⅲ
一步式RT-PCR Mix粪产碱杆菌亚种35655

Cytomegalovirus (CMV)Pp38 (UL80a)recombinant, region (117-373aa)

粪肠球菌29212

Cytomegalovirus (CMV)Pp52 (UL44) recombinant,region (202-434aa)

腐生葡萄球菌亚种15305

Cytomegalovirus (CMV)Pp65 (UL83) recombinant,region (297-510aa)

副溶血性嗜血杆菌10014

Cytomegalovirus

高里假丝酵母6260

CytoMegaloVirus Antigen
设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。