特性：

NCI-H460 [H460](大细胞肺癌细胞)安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

CLK4 (Dual specificity protein kinase CLK4) ELISA KITPorcine IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA KitN-苯基脲组织半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3）活性比色法定量检测试剂盒

CTCF (Transcriptional repressor CTCF) ELISA KITPorcine IL-2(Interleukin 2) ELISA KitN-苯基脲细胞半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3）活性荧光定量检测试剂盒

CD2BP2 (CD2 antigen cytoplasmic tail-binding protein 2) ELISA KITPorcine IL-23(Interleukin 23) ELISA Kit壬基酚(异构体混合物）组织半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3）活性荧光定量检测试剂盒

CD300E (CMRF35-like molecule 2) ELISA KITPorcine IL-4(Interleukin 4) ELISA Kit壬基酚(异构体混合物）细胞半胱氨酸蛋白酶-4（CASPASE-4）活性比色法定量检测试剂盒

CD83(CD83 antigen) ELISA KitPorcine IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit壬基酚聚氧乙烯醚(NP-40)组织半胱氨酸蛋白酶-4（CASPASE-4）活性比色法定量检测试剂盒

CD99L2 (CD99 antigen-like protein 2) ELISA KITPorcine KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit壬基酚聚氧乙烯醚(NP-40)细胞半胱氨酸蛋白酶-4（CASPASE-4）活性荧光定量检测试剂盒

CASS4 (Cas scaffolding protein family member 4) ELISA KITPorcine LEP(Leptin) ELISA KitN,N-二甲基乙醇胺组织半胱氨酸蛋白酶-4（CASPASE-4）活性荧光定量检测试剂盒

CLK4 (Dual specificity protein kinase CLK4) ELISA KITPorcine LH(Luteinizing Hormone) ELISA Kit1-BOC-2-甲基哌嗪细胞半胱氨酸蛋白酶-5（CASPASE-5）活性比色法定量检测试剂盒

PES1 ELISA KitMST4  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MST4抗体三乙胺三氢氟酸盐银杏内酯B进口/国产Aconitase 2/ACO2  铁调节蛋白2抗体含量：HPLC≥98%

PELI1 ELISA KitMAP3K14/NFkB Inducing Kinase NIK  丝裂原活化蛋白激酶3K14抗体三乙胺三氢氟酸盐银杏内酯C进口/国产ACOX1  过化物酶酰辅酶A化酶1抗体含量：HPLC≥98%

CYP11A1(Cholesterol side-chain cleavage enzyme, mitochondrial) ELISA KitCullin 5/CUL5  血管加压素激活钙启动受体蛋白1抗体4-(三氟甲基)-1H-咪唑白果内酯进口/国产ACOX2  过化物酶酰辅酶A化酶2抗体含量：HPLC≥98%

PELI2 ELISA KitAQP8/Aquaporin 8  水通道蛋白8抗体二环己基[2,4,6-三(1-甲基乙基)苯基]膦斑蝥进口/国产ADCY1  苷酸环化酶1抗体含量：HPLC≥98%

PFKFB2 ELISA KitSLC26A4  钠碘单独转运蛋白SLC26A4抗体二环己基[2,4,6-三(1-甲基乙基)苯基]膦去斑蝥进口/国产ADCY2  苷酸环化酶2抗体含量：HPLC≥98%

PES1 ELISA KitGranzyme K  颗粒酶K抗体3'-TBDMS-BZ-RA 亚磷酰胺单体植酸进口/国产ADCY3  苷酸环化酶3抗体含量：HPLC≥98%

HCRTR1(Orexin receptor type 1) ELISA KitSRGN/Chondroitin sulfate proteoglycan core protein  硫酸软骨素多糖核心蛋白抗体锡粉龙胆苦苷进口/国产ADCY4  苷酸环化酶4抗体含量：HPLC≥98%

PEX1 ELISA Kit14-3-3 zeta/delta  14-3-3 protein ζ/δ抗体锡粉胆酸进口/国产ADCY5  苷酸环化酶5抗体含量：HPLC≥98%

实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。