测定原理
在酸性条件下,植物原花青素 A 环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应,产生有色化合物,在 500nm 处有特征吸收峰,测定 500nm 处光吸收值,可计算植物中原花青素的含量。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、蒸馏水、8%盐酸和 60%乙醇。
试剂组成和配制(50T/24 样)
提取液:60%乙醇,自备,4°C保存。(30ml 无水乙醇溶于 20ml 蒸馏水)
试剂一:8%盐酸 20ml,自备,4°C保存。(1.6ml 盐酸溶于 18.4ml 甲醇)
试剂二:粉剂 0.2g×1 瓶,4°C避光保存,临用前加 20ml 甲醇溶解。
工作液:临用前按照用 将试剂一和试剂二按照 1:1 混合。
OPC提取:
原花青素的提取详见试剂盒内说明书。
操作步骤:
| 对照管 | 测定管 |
样本(μl) | 200 | 200 |
工作液(μl) |
| 800 |
蒸馏水(μl) | 800 |
|
混匀,30°C水浴 30min,波长 500nm,1ml 玻璃比色皿,双蒸水调零,
测定各管吸光度值,计算△A= A 测定- A 对照。