测定原理:
在碱性亚硝酸盐溶液中,类黄酮与铝离子形成在502nm处有特征吸收峰的红色络合物,测定样品提取液在502nm处的吸光值,即可计算样品类黄酮含量。
仪器设备(自备):
烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度、1mL玻璃比色皿
试剂组成:(50T/48 样)
提取液:60%乙醇,自备。
试剂一:液体2mL×1 瓶,4°C保存。
试剂二:液体2mL×1 瓶,4°C保存。
试剂三:液体20mL×1 瓶,4°C保存。
操作步骤:
1、类黄酮提取:将样本烘干至恒重,粉碎,过40目筛之后,称取约0.02g,加入2mL提取液,60°C震荡提取2小时,10000g,25°C,离心10min,取上清,待测。
2、操作步骤:
| 对照管 | 测定管 |
样本待测液(ml) |
| 0.54 |
双蒸水(ml) | 0.54 |
|
试剂一(ml) | 0.03 | 0.03 |
混匀,室温静置5min;
混匀,室温静置5min;
混匀,静置15 min,双蒸水调零,波长502nm,1mL比色皿,测定各管吸光度值(ΔA502=A测定-A对照)。
计算公式:
标准曲线 y = 5.02x+0.0007,R2 = 0.9996
V 样总:加提取液体积,2mL; V 样:反应中样品体积,0.54mL; W:样品质量,g。