正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

多糖是生物体中广泛存在的物质，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，它是生物体内重要的生物大分子，是维持生命活动正常运转的基本物质之一。

测定原理

利用水提醇沉法提取总多糖，苯酚-硫酸法测定总多糖含量。

需自备的仪器和用品

酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、无水乙醇、浓硫酸、蒸馏水、水浴锅。

试剂的组成和配制

试剂一：12mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：无水乙醇，自备；

试剂三：浓硫酸，自备。

总多糖提取

样本烘干粉碎，称取约 0.05g 样本，加入 1mL 水，充分匀浆。100℃水浴提取 2h(必须盖紧盖子防止水分流失)，冷却后 10000g 离心 10min，取上清。吸取 0.2mL 上清，慢慢加入 0.8mL 无水乙醇，混匀后 4℃静置过夜，10000g 离心10min，弃上清，沉淀中加入 1mL 水，充分混匀溶解沉淀后待测。

测定步骤

1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 490nm。

2、吸取 200μL 待测样本，加入 100μL 试剂一和 0.5mL 浓硫酸，混匀后 90℃水浴 20min，流水冷却。取 200μL 加入酶标板，于 490nm 下测定吸光值 A。

总多糖含量计算

以葡萄糖作为对照品，标准条件下测定回归方程为 y = 7.981x - 0.0037，R2 = 0.9973，x 为葡萄糖含量(mg/mL)，y 为吸光值。

总多糖含量(μg/g 干重)= (A +0.0037)÷7.981×V1÷V2×V3÷W×1000=626.49×(A+0.0037)÷W

V1：醇沉后重新溶解后的体积，1mL；V2：进行醇沉的体积，0.2mL；V3，提取时加入水的体积，1mL；W：样本质量，g；1000，mg 到 μg 的换算系数。