土壤几丁质酶检测试剂盒(可见分光光度法)

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包装:

50管/24样

产品介绍

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC₃.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与3.5-二硝基水杨酸产生棕红色化合物，在540nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

产品组成：

提取液：液体80ml×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体40ml×1瓶，4℃保存，使用前摇匀。

试剂二：液体15ml×1瓶，4℃保存。

标准品：粉剂×1瓶。5mgN-乙酰氨基葡萄糖，4℃保存。临用前加入2.27ml蒸馏水配成10μmol/ml的标准溶液。

需自备的仪器和用品：

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿，研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取

1.组织:按照组织质量(g) :提取液体积(ml)为1: 5～10的比例(建议称取约0.15g组织，加入1.5ml提取液)进行冰浴匀浆，然后10000rpm, 4℃离心20min,取上清，置冰上待测。

2.真菌:按照细胞数量(104个) :提取液体积(ml)为500～1000: 1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min) ；然后12000rpm, 4°C离心20min,取上清置于冰上待检。

3.培养液:直接测定。

二、测定操作表

1.可见分光光度计预热30min。波长调至540nm，蒸馏水调零。

2.将标准溶液稀释为4、3、2.5、2、1μmol/ml的标准溶液备用。

3.在EP管中分别加入:

试剂名称	测定管	对照管	标准管	空白管
样品(ml)	0.5	0.5	-	-
标准溶液(ml)	-	-	0.5	-
蒸馏水(ml)	-	-	-	0.5
试剂一(ml)	0.5	-	0.5	0.5
混匀，37℃水浴1h，沸水浴5min。
试剂一(ml)	-	0.5	-	-
8000rpm，常温离心10min，分别取上清液0.8ml于新的EP管中。
试剂二(ml)	0.2	0.2	0.2	0.2
混匀，沸水浴反应10min，立即置于冰上至室温。测定每管在540nm下的吸光度，记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。