测定原理:
叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm分别具有最大吸收峰,根据叶绿素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在最大吸收波长测定其吸光度,从而计算叶绿素a、叶绿素b和总 叶绿素含量。
仪器设备:
可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、10ml玻璃试管、研钵、天平、锡箔纸、无水乙醇、丙酮和蒸馏水。
试剂组成:(50T/48 样)
试剂一:粉剂×1 瓶,4°C保存;
操作步骤:
1、取新鲜植物叶片或其他组织,对于植物叶片去掉中脉,称取 0.1g 剪碎,蒸馏水清洗干净。
2、将无水乙醇和丙酮按照 1:2(v:v)比例充分混匀为提取液待用。
3、将步骤 1 处理样本中加入 1ml 蒸馏水,少量试剂一(50mg),在避光条件下充分研磨后置于 10ml 玻璃试管内。
4、用提取液冲洗研钵,将洗液转移至玻璃试管,提取液定容至 10ml,在避光条件下浸提约3h,直到观察到底部残渣变白下提取完全,若不能避光则使用锡箔纸置于玻璃试管上遮蔽光线。
5、浸提液取 1ml 于 1ml 玻璃比色皿,提取液调零,分别测定 663 和 645nm 处吸光度,分别为 A663 和 A645