与固相筛选相比，使用完整细胞作为筛选底物的最大优势在于细胞膜表面的受体保持天然构象，受体蛋白无需纯化，更有利于筛选功能性抗体。噬菌体抗体库不仅可以通过与细胞结合进行筛选，还可以通过内化进行筛选。由于配体-受体结合后，配体-受体复合物可通过细胞内化作用被吞入细胞，因此这种方法可用于筛选可通过细胞内化作用被内化的噬菌体抗体。抗体-抗原结合可以模拟这一过程，因此这种方法可用于筛选可被细胞内化的抗体。

一．细胞筛选原理

细胞表面分布着大量的信号分子，它们反映了细胞的特性以及所处的功能状态。虽然可以将分子直接作为筛选标靶，但对于纯化困难或表达量少的受体等分子，它们需要完整的细胞膜，或者与细胞膜上的其他亚单位形成复合物才能发挥作用。

二．全细胞筛选的优缺点

三．全细胞筛选策略

四．细胞筛选的实验流程

(1) 细胞处理：筛选用细胞中加入EDTA，4℃、1000rpm离心10min；

(2) 洗涤：处理好的细胞用无血清DMEM培养基4℃、2000rpm离心1min，洗涤1-2次；

(3) 孵育噬菌体：取提前制备的噬菌体溶液加入至筛选细胞中，加入DMEM培养基，4℃孵育2h；

(4) 洗涤：孵育好的细胞用无血清DMEM培养基4℃、3000rpm离心1min，洗涤8-10次，再用PBST洗涤3次；

(5) 洗脱：4℃、3000rpm离心5min离心，弃去上清，加入Tris-HCl(pH=3.0)，重悬细胞，4℃、4000r离心5min，迅速用Tris-HCl(pH=8.0)中和至约pH=7.0。

(6) 活化2738：取两支离心管，倒入LB 液休培养基，加入四环不素，其中一支加入从2738平板上挑一个单个菌落，另一支做空白对照，37℃，250r的摇床内培养4h。

(7) 洗脱产物稀释：取3支无菌的1.5ml离心管，分别加入无菌的LB培养基，向第一管内加入脱产物，混匀，从第一支内取出加入第二支管內，混匀，再从第二管取出加入第三管内，混匀。

(8) 侵染：取3支无菌的离心管，分别加入活化好的2738菌液，及稀释的洗脱产物（一个梯度一支管），在37°C放置1.5h。

(9) 倒板：向侵染的菌液加入3-4ml 己加过IPTG及x-gal的上层胶，混匀，倒在IPTG+X-gal的平板上（平板需先在37℃培养箱内预热至少1h），放在37°C培养箱内，培养过夜。

五．当前比较成功的细胞筛选方法主要有：

(1) 差减筛选：应用该方法从噬菌体抗体库中筛选靶向黑色素瘤细胞的抗体。举例具体操作：先用黑色素瘤细胞进行几轮阳性筛查，然后用正常黑色素瘤进行阴性筛查，以扣除不与阳性细胞特异性结合的抗体。由于细胞表面抗原浓度低，加上演绎筛选的固有缺陷，这种筛选方法非常困难。

(2) 细胞内化筛选：某些抗体与细胞表面抗原结合，抗原-抗体复合物可以被吞噬到细胞中，因此可以使用细胞内化筛选方法来筛选此类抗体。有研究证明，这种筛选方法是可行的，而且比细胞表面筛选更容易获得特异性噬菌体抗体。

六．全细胞筛选法的应用

全细胞筛选法可应用于寻找新的受体、配体及抗原表位分析，新型肽苗的开发，基因治疗靶向载体的筛选，肿瘤靶向治疗载体的筛选，酶受体激动剂和拮抗剂的开发，疾病的检测及治疗等多个方面。