间充质干细胞微载体/片状载体培养细胞计数解决方案
作者：艾贝泰 2024.10.10 点击23次
间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSC)是一类多能干细胞，能够分化为多种细胞类型，有很强的自我更新能力，具有免疫调节功能，且能分泌多种生物活性因子促进组织修复和再生。因此，MSC在再生医学、组织工程、免疫调节、药物筛选等方面有着广泛的应用潜力。 MSC属于贴壁依赖的细胞，通常需要附着在培养表面才能保持干性以及有效增殖和生长。为了进一步发挥MSC的功能，通常会利用微载体或者片状载体进行大规模培养。在MSC的微载体/片状载体培养过程中，常规使用的是胰酶消化后的细胞悬液进行细胞计数，观察MSC细胞浓度变化和活率变化，但也面临一些问题： 胰酶消化微载体上的细胞，往往不能完全消化； 胰酶过度消化也容易造成细胞损伤，活性下降。  艾贝泰Countleader®双荧光细胞计数仪，搭配艾贝泰自产细胞裂解液A+B液，可很好的解决胰酶消化操作复杂、结果准确性低的问题。 MSC微载体培养计数方法 首先将培养的MSC样本分为两份： 一份样本中按等体积加入Reagent A100 裂解缓冲液处理微载体悬浮培养物，裂解缓冲液使细胞质膜通透并从微载体上释放细胞核。然后用等体积的Reagent B稳定细胞核，形成稳定的细胞核悬液(样品1)，取样品1与AOPI染料1:1 混合，吸取15μL 染色后的细胞样品加入到FL8-slides耗材的待测通道中(通道1)。 另外一份样本(样品2)同时与AOPI染料1:1 混合， 吸取15μL染色后的细胞样品加入到FL8-slides耗材的待测通道中(通道2)。 Countleader® FL 1000细胞计数仪内置“Viability and Cell Count Assay A100 And B”分析方法。通道1获得总细胞浓度，通道2获得死细胞浓度。
PI能够与死细胞、细胞裂解后的细胞核染色，呈现红色荧光。无需手动计算，设备软件自行运算，直接快速、准确的获得微载体培养MSC的活细胞浓度以及活率。
MSC片状载体培养计数方法 收集2-3个片状载体至50 mL离心管中，加入适量体积(淹没整个片状载体为准)的Reagent A100 裂解缓冲液，裂解10 min(按照不同载体材质，裂解时间可分别设置5 min、10 min、15 min、20 min等，如果延长时间后，细胞数量没有显著增加，可以确定最佳孵育时间)，加入等体积的Reagent B 稳定细胞核，混合均匀。 取裂解完毕后的混合液与AOPI染料1:1 混合,吸取15μL 染色后的细胞样品加入到FL8-slides耗材的待测通道中。Countleader® FL 1000细胞计数仪内置“Viability and Cell Count Assay (AOPI)”分析方法，设置样本名称、视野面积以及稀释倍数。PI能够与细胞裂解后的细胞核染色，呈现红色荧光。  ·裂解后细胞核图片· 细胞计数结果：片载体细胞浓度（cells/cm2）=  注：艾贝泰提供的Reagent A100和Reagent B也可用于结团细胞的裂解计数，精确获得结团细胞的计数结果。 Countleader® FL 1000细胞计数仪，具备台盼蓝、AOPI双荧光双分析模式，8通道耗材，操作简单，重复性好，符合FDA的21 CFR Part11的要求！
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