测定原理:
果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与DNS试剂反应生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
自备仪器或用品:
天平、恒温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿(光径1cm)、恒温水浴锅。
试剂盒组成(50T/24 样):
提取液:液体50mL×1 瓶,4°C保存。
试剂一:液体30mL×1 瓶,4°C保存。
试剂二:粉剂×2瓶,4°C保存。临用前加入12.5mL试剂一,50°加热溶解,保存一周。
试剂三:液体30mL×1 瓶,4°C避光保存。
粗酶液提取:
粗酶液提取详见试剂盒内说明书。测定细菌、组织和细胞时需要测定蛋白浓度。
操作步骤:
50°C水浴孵育5min;
| 对照管 | 测定管 |
样本(ml) |
| 0.1 |
煮沸样本(ml) | 0.1 |
|
混匀,50°C水浴反应30min;
沸水浴5min,冰浴冷却终止反应,8000g,4°C,离心10min,取上清,波长540nm, 1mL
玻璃比色皿(光径1cm),蒸馏水调零,测定各管吸光度值A,△A=A测定管-A对照管。