生物活性

Sulfo-SMCC sodium 是一种常用的异双官能交联剂，是不可降解的 ADC linker，其带有N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 酯和马来酰亚胺基团，分别与伯胺和巯基反应。NHS酯与pH 7?9的伯胺反应形成酰胺键，而马来酰亚胺与pH 6.5?7.5的巯基反应形成稳定的硫醚键。在水溶液中，NHS酯的水解降解是竞争性反应，其速率随pH的增加而增加。马来酰亚胺基团比NHS-酯基团稳定，但在pH值> 7.5时会缓慢水解并失去其对巯基的反应特异性。Sulfo-SMCC可溶于水和许多其他水性缓冲液，约10 mM。

Sulfo-SMCC 常用于制备抗体-酶偶联物或者半抗原的制备。一般推荐两步法操作，第一步过量的Sulfo-SMCC先和含有氨基的蛋白进行反应，通过脱盐柱或者透析方式去除未反应的Sulfo-SMCC，第二步把含有巯基的蛋白与修饰后氨基蛋白进行连接反应。

注意事项

o Sulfo-SMCC 极易受潮。打开瓶盖使用前必须平衡至室温，避免试剂受潮而失效。试剂保证现用现配，剩余的试剂应当丢弃，不得倒回原瓶中。

o Sulfo-SMCC在水中的溶解浓度约为10mM, 随着溶液中盐浓度的增加而减少。最好用去离子水配置母液，一旦Sulfo-SMCC溶解可以用PBS或其他无氨基溶液稀释。

o 在偶联过程中，不能使用含有氨基的缓冲液（如Tris或者 glycine) ，或者含有巯基的缓冲液。如果反应体系中含有相关组分，建议透析到适合的缓冲液中，如PBS缓冲液。

o 与马来酰亚胺（maleimide groups）基团反应的蛋白必须保证含有自由的巯基，如果形成二硫键，需要使用还原剂（如DTT，TCEP等）打断二硫键，还原出自由的巯基。

使用方法

一般推荐交联剂的摩尔数是含有氨基蛋白的10-50倍，以保证充分的活化含有氨基的蛋白。

材料准备

o 偶联液：磷酸盐缓冲液（PBS = 100mM sodium phosphate, 150mM sodium chloride, pH 7.2）或者其他不含氨基或者巯基的缓冲液pH 6.5-7.5。建议添加1-5mM的EDTA，减少二硫键的形成；

o 脱盐柱；

o 需要偶联的目标分子：含有氨基的蛋白和含有巯基的蛋白。

操作流程

1. 使用偶联液溶解含有氨基的蛋白，或者将含有氨基的蛋白透析至偶联液中。

2. 向蛋白溶液中加入合适量的交联剂，交联剂和蛋白安排一定摩尔比进行反应，推荐使用量如下：

当蛋白浓度小于1mg/ml时，交联剂与蛋白的摩尔比为40-80；

当蛋白浓度为1-4mg/ml时，交联剂与蛋白的摩尔比为20；

当蛋白浓度为5-10mg/ml时，交联剂与蛋白的摩尔比为5-10。

3. 混合均匀，室温下孵育反应30分钟，或者4度下孵育反应2小时。

4. 反应结束后，使用脱盐柱去除未反应的交联剂，使用偶联液进行平衡。

5. 将含有巯基的蛋白加入到活化的蛋白溶液中，含有巯基蛋白的加入量根据两个蛋白需要偶联的比例或蛋白上巯基和活泼氨基的数量定。

6. 混合均匀，室温下孵育反应30分钟，或者4度下孵育反应2小时。

7. 反应结束后，完成蛋白的交联实验。

8. 通过SDS-PAGE电泳鉴定两种蛋白的偶联效果。

化学数据

不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于FDA指南）

例如，依据体表面积折算法，将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将20 mg/kg 乘以小鼠的K_m系数（3），再除以大鼠的K_m系数（6），得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。

储备液配制

以下数据基于产品分子量，对于特殊产品，请参照COA中的储备液配制条件和说明进行操作。