激酶抑制实验

丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶催化NADH氧化，伴随着ATP的消耗，观察在340 nm处的吸光值降低。反应包括100 mM Tris (pH 8), 10 mM MgCl2, 2.2 mM ATP, 1 mM磷酸烯醇丙酮酸, 0.6 mg/mL NADH, 75 units/mL丙酮酸激酶, 105 units/mL乳酸脱氢酶和0.5 mM底物多肽(序列为：EAIYAAPFAKKK)。加入足量的激酶开始反应 (75 μL)，反应所需的激酶浓度达到30 nM。在30 °C下，用微量滴定板分光光度计测定30分钟内的吸收率减少值。将3.75 μL VX-680加入100% DMSO中，或单独使用DMSO，获得抑制常数。按如下公式计算Ki值，Ki = IC50 / (1 + [S]/Kd)，[S] = [ATP] = 2.2 mM，Kd (of ATP to Abl) = 70 μM。对于野生型和H396P Abl激酶区，假设Kd (ATP)为μM，计算以上各值。

细胞系

CAL-62细胞

制备方法

在DMSO中的溶解度大于10 mM。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37 °C加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20 °C可放置数月。

反应条件

5 ~ 500 nM；4天

实验结果

VX-680呈时间依赖性地抑制CAL-62增殖。

动物模型

携带HL-60白血病细胞的雌性无胸腺NCr裸鼠

给药剂量

12.5、25、50或70 mg/kg；腹腔注射；每日2次，持续13天

实验结果

在携带HL-60白血病细胞的雌性无胸腺NCr裸鼠中，VX-680（70 mg/kg；腹腔注射；每日2次，持续13天）减少98％的肿瘤体积。

其它注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

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[2]. Arlot-Bonnemains Y, Baldini E, Martin B, Delcros JG, Toller M, Curcio F, Ambesi-Impiombato FS, D'Armiento M, Ulisse S. Effects of the Aurora kinase inhibitor VX-680 on anaplastic thyroid cancer-derived cell lines. Endocr Relat Cancer. 2008 Jun;15(2):559-68.

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