包装: | 25 rxns |
市场价: | 9200元 |
HyperScribe(TM) All in One mRNA Synthesis Kit II Plus 1 (EZ Cap Reagent AG (3' OMe), 5mCTP, ψUTP, T7, poly(A)) 试剂盒用于在体外快速合成 EZ Cap Reagent AG (3' OMe) 加帽,5mCTP和 ψUTP修饰,poly(A)加尾的mRNA。通过使用T7 RNA聚合酶,加帽试剂(EZ Cap Reagent AG (3' OMe),货号B8178)以共转录方式被掺入mRNA 5'端,形成Cap1结构。EZ Cap Reagent AG (3' OMe)的添加保护mRNA免于降解并确保高翻译效率。修饰核苷酸5mCTP(货号B7967)和ψUTP(Pseudo-UTP,货号B7972)的添加可以减少宿主细胞的免疫反应。经过短暂的DNase I处理以去除模板DNA后,加帽和修饰的mRNA可以利用Poly(A)聚合酶在3'端进行加尾。聚腺苷酸化(即Poly(A)尾的添加)使mRNA更加稳定并提高mRNA的翻译起始效率。
该试剂盒有诸多应用,例如体外翻译、反义RNA和RNAi实验、RNA疫苗,RNA结构和功能研究,核酶生物化学,RNase蛋白质实验和基于探针的杂交印迹。
每次标准反应为20 μL,该试剂盒可进行25次反应。对于每次的标准反应,1 μg 的对照模板可产生25-180 μg 的RNA。
(1)mRNA的合成(EZ Cap Reagent AG (3' OMe)加帽,5mCTP和 ψUTP修饰) | |
组分 | 25 rxns |
T7 RNA Polymerase Mix | 50 μL |
10X Reaction Buffer | 50 μL |
ATP (20 mM) | 50 μL |
UTP (20 mM) | 25 μL |
CTP (20 mM) | 25 μL |
GTP (20 mM) | 25 μL |
EZ Cap Reagent AG (3' OMe) (60 mM) | 35 μL |
5mCTP (10 mM) | 50 μL |
Pseudo-UTP (10 mM) | 50 μL |
Control Template (0.5 μg/μL) | 5 μL |
RNase-free H2O | 0.5 mL |
所有的组分请在-20°C保存。 | |
(2)mRNA的加尾 | |
组分 | 25 rxns |
E-PAP (2 units/μL) | 100 μL |
5X E-PAP Buffer | 600 μL |
ATP Solution (100 mM) | 100 μL |
25 mM MnCl2 | 250 μL |
Nuclease - free Water | 1 mL x 2 |
所有的组分请在-20°C保存。 |