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2X HyPerFUsion(R)High-Fidelity Master Mix(With dye)
本产品不向个人销售,仅用作科学研究,不用于任何人体实验及非科研性质的动物实验。
2X HyPerFUsion(R)High-Fidelity Master Mix(With dye)图片
包装与价格:
包装价格(元)
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产品介绍

描述

我们的产品2X HyPerFUsion(R) High-Fidelity Master Mix (With dye) 能够为大部分PCR应用同时提供高保真性,强大的扩增能力和更快的扩增速度。HyPerFUsion DNA聚合酶由Pyrococcus样校正聚合酶与DNA结合结构域融合形成。其独特的结构,一种新型Pyrococcus样酶与具有增强合成能力的结构域融合,增加了保真度和速度。高保真度使得HyPerFUsion DNA聚合酶成为检测或其他后续应用的较优选择。 HyPerFUsion DNA聚合酶是具有最高的保真度的DNA聚合酶中的一个,其错误率比Taq DNA聚合酶低50倍,比Pyrococcus Furious DNA聚合酶低6倍。

HyPerFUsion DNA聚合酶具有5→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性。它会在扩增产物两端产生平端,而没有A突出(A突出通常出现在用Taq聚合酶扩增的产物中)。在实验中我们的HyPerFUsion聚合酶能够扩增长达10 kb的片段。在PCR反应中,HyPerFUsion(R)DNA聚合酶的延伸速率约为15-30 sec / kb(取决于基因的复杂性)。

2X HyPerFUsion(R) High-Fidelity Master Mix(含染料)是一种即用型2X预混液,其中包含聚合酶,dNTP,已经优化的缓冲系统和染料。 我们的产品适应于多种检测,PCR产物可以在扩增后直接进行电泳,而无需添加上样缓冲液。

如果后续实验是克隆,则产品2X HyPerFUsion(R) High-Fidelity Master Mix(货号K1039)不含染料版本是您更合适的选择。

组份和存储

ComponentSize
2X HyPerFUsion(R) High-Fidelity Master Mix (With dye)1 mL
2X HyPerFUsion(R) High-Fidelity Master Mix (With dye)5 mL
2X HyPerFUsion(R) High-Fidelity Master Mix (With dye)10 mL

将master mix 储存于-20°C。

常见问题解答

1)Q:HyPerFUsion扩增后的产物是否带A,若后面要做TA克隆该如何操作?

A:使用HyPerFUsion DNA聚合酶产生的PCR产物具有平末端。如果下一步是克隆,那么推荐使用平端克隆。如果您期望选择T/A克隆,那么DNA应该在A突出加入前纯化(任何剩余的HyPerFUsion DNA聚合酶将降解A突出,再次产生平端)。可以用Taq DNA聚合酶或Klenow exo-酶添加无模板的A突出。可以在10 μL反应混合物中用1X Taq缓冲液、2.5mM MgCl2、0.2mM dATP和1U Taq DNA聚合酶在72°C孵育30分钟。

2)Q:PCR扩增产物条带弥散或者拖尾?

A:可能原因及解决方案如下:

(1) 引物降解:可更换引物排除是否因存储存不当而使引物降解。

(2) 反应程序不够优化:可能退火温度不合适,对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度。

(3) HyPerFUsion DNA聚合酶量过多:一般按0.5-1U /50 μL反应加入。

(4) 模板降解或过量:可通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新制备模板。

(5) 琼脂糖凝胶制备不当:待琼脂糖完全融化后再加入制胶槽。

3)Q:PCR扩增产物条带大小与理论不符?

A:可能原因包括:(1) 实验操作不当体系导致污染污染:对工作台进行清洁,使用全新的试剂和耗材重复实验;(2) 模板或引物拿错:更换正确的模板和引物重新实验;(3) 存在基因亚型:可对研究的基因进行序列分析和BLAST研究,确保是否存在基因亚型。

4)Q:空白对照扩增出现条带?

A:可能原因包括: (1) 引物设计不合理:扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列;(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染,使用全新的试剂和耗材重复实验。

5)Q:PCR扩增特异性差,出现较多非特异性条带?

A:可能原因包括:(1) 引物设计不佳:引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度或重新设计引物;(2) 模板不纯或被污染:需重新制备模板;(3) PCR程序设计不够优化:如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度,降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数;(4) HyPerFUsion DNA聚合酶加入过多:一般按0.5-1U/50 μL反应加入。

6)Q:PCR扩增效率低后无扩增条带?

A:可能原因包括: (1) 引物:检查引物是否因存储不当而降解,引物设计是否合理;(2) 模板:长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度;(3) 扩增体系:反应体系配制错误,建议重复实验;(5) 反应程序温度:如果变性温度过高,酶在前几个循环就迅速失活,温度过低则模板变性不彻底;若退火温度不合适,可对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度;检查延伸时间是否充足;(6) Mg2+浓度:Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败,Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性。