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Y-27632
本产品不向个人销售,仅用作科学研究,不用于任何人体实验及非科研性质的动物实验。
Y-27632图片
CAS NO:146986-50-7
包装与价格:
包装价格(元)
10mM (in 1mL DMSO)电议
10mg电议
50mg电议
200mg电议

产品介绍

化学性质

StorageStore at -20°C
M.Wt247.34
Cas No.146986-50-7
FormulaC14H21N3O
Solubility≥24.7 mg/mL in DMSO; insoluble in Chloroform
Chemical Name4-[(1R)-1-aminoethyl]-N-pyridin-4-ylcyclohexane-1-carboxamide
Canonical SMILESCC(C1CCC(CC1)C(=O)NC2=CC=NC=C2)N
运输条件蓝冰运输或根据您的需求运输。
一般建议为了使其更好的溶解,请用37℃加热试管并在超声波水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异,仅做参考。若实验所需浓度过大至产品溶解极限,请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。溶液形式一般不宜长期储存,请尽快用完。

资料参考

Y-27632是ROCK的特异性抑制剂,对ROCK1和ROCK2的Ki值分别为0.22 μM和0.30 μM。与对其它Rho效应激酶、citron激酶、PKN以及PKCα的Ki值相比,Y-27632对ROCK的抑制具有选择性。Y-27632作用于citron激酶和PKN的Ki值比ROCK激酶至少高20倍,比PKCα高大约200倍。在HeLa细胞中,Y-27632通过与ATP竞争结合,抑制ROCK1和ROCK2激酶。另外,10 μM的Y-27632抑制Swiss 3T3细胞的应力纤维 [1]。

参考文献:
[1] Ishizaki T1, Uehata M, Tamechika I, Keel J, Nonomura K, Maekawa M, Narumiya S. Pharmacological properties of Y-27632, a specific inhibitor of rho-associated kinases. Mol Pharmacol. 2000 May;57(5):976-83.

试验操作

激酶实验 [1]:

激酶实验

通过使用Lipofectamine在HeLa细胞中转染Myc标记的重组ROCK-1、ROCK-II、PKN或citron激酶,并通过使用9E10单克隆抗Myc抗体偶联G蛋白琼脂糖凝胶从细胞裂解物中进行沉淀。在不存在或存在各种浓度的Y-27632下,将回收的免疫复合物与各种浓度的 [32P] ATP及10 mg组蛋白2作为底物一起温育,于总体积为30 mL激酶缓冲液中30°C反应30分钟,缓冲液包含50 mM HEPES-NaOH、pH 7.4、10 mM MgCl2、5 mM MnCl2、0.02%Briji 35和2 mM二硫苏糖醇。在不存在或存在各种浓度的Y-27632下,将PKCa与5 mM [32P] ATP和200 mg/ml组蛋白2作为底物,在30°C下在总体积为30 mL的激酶缓冲液中反应30 min,缓冲液配方为50 mM Tris-HCl、pH 7.5、0.5 mM CaCl2,5 mM乙酸镁,25 mg/mL磷脂酰丝氨酸,50 ng/mL 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate和0.001%亮肽素。使用43 Laemmli样品缓冲液(10 mL)终止反应。

细胞实验 [1]:

细胞系

HeLa细胞,Swiss 3T3细胞

溶解方法

该化合物在DMSO中的溶解度大于10 mM。若获取更高浓度的溶液,可在37°C下孵育10分钟,随后在超声波浴中摇匀。-20°C以下可储存数月

反应条件

0.3和1 μM, 30 min或24 h

应用

Y-27632抑制ROCK-1和ROCK-II的激酶活性,ATP以竞争性方式逆转了这种抑制作用。在Swiss 3T3细胞中,Y-27632(10 μM)消除了应激纤维,但在该浓度下,细胞周期的G1-S转变和胞质分裂几乎不受影响。在Swiss 3T3细胞中,Y-27632细胞预处理30分钟以浓度依赖性方式防止细胞形状及肌动蛋白应激纤维发生变化,在10 μM浓度下几乎完全抑制。10和100 μM的Y-27632延长了延迟时间,并以浓度依赖性方式将BrdU标记细胞的出现延迟约1和4小时。在HeLa细胞中,30 μM Y-27632抑制胞质分裂。

注意事项

由于实验环境的不同,实际溶解度可能与理论值略有不同,请测试室内所有化合物的溶解度。

References:

[1]. Ishizaki T, Uehata M, Tamechika I, et al. Pharmacological properties of Y-27632, a specific inhibitor of rho-associated kinases[J]. Molecular pharmacology, 2000, 57(5): 976-983.

生物活性

描述Y-27632是ROCK1(p160ROCK)的选择性抑制剂,Ki值为140 nM。
靶点ROCK1 (p160ROCK)ROCK2    
IC50140 nM(Ki)300 nM(Ki)