| 包装: | 50-500 tests |
| 市场价: | 600元 |
测量细胞增殖和细胞周期是评估细胞健康，确定遗传毒性和评估药物药效的基本方法。常用的方法是直接测量DNA的合成。在以往的实验中，有几种方法，例如掺入放射性核苷（3H-thymidine）或BrdU。在这里，我们介绍一种新方法，点击化学-CuAAC（铜催化的叠氮化物-炔烃环加成反应），以及使用该反应直接测量在细胞周期S期的DNA合成。 “点击化学”是K. B. Sharpless于2001年引入的一个术语，它是生物连接中常用的一组具有生物相容性的小分子反应，允许将底物与特定生物分子（例如报道分子）结合在一起。
胸腺嘧啶核苷类似物，EdU（5-ethynyl-2’-deoxyuridine）可以在DNA合成过程中掺入DNA链中。 EdU的炔基是一种生物惰性基团，可以通过CuAAC反应与染料的叠氮基发生极强的选择性反应，从而生成1,2,3-三唑产物。 EdU和Cy3 / Cy5 azide具有生物学上独特的基团，其连接后可以荧光标记增殖细胞的DNA，实验者可以获得低背景和高检测灵敏度。这种CuAAC反应可在极温和的条件下提供出色的区域选择性和定量转化。该反应是高效的，并且可以通过流式细胞术或荧光显微镜定量地使用。
EdU是BrdU的理想替代品，因为它不受苛刻的DNA变性条件（通常使用HCl，加热或用DNase消化）的影响。在基于BrdU的检测中，需要额外的DNA变性以使BrdU暴露于抗BrdU抗体，抗体与基于EdU的检测中使用的荧光染料相比是巨大的。与巨大的抗体不同，炔基和叠氮基的体积非常小，因此Cy3 / Cy5 azide在基于醛的标准固定和去污剂透化作用下就可以进入DNA。此外，基于BrdU的方法耗时且难以连贯的进行，BrdU的抗体可表现出非特异性结合，此方法所需的苛刻处理可能会对样品的完整性，细胞形态和图像质量产生不利影响。由于在基于EdU的测定中反应条件温和，因此您可以准确确定细胞增殖，同时保留细胞形态，DNA完整性，抗原结合位点。 DNA完整性的保留是您可以进行DNA染色，包括使用用于细胞周期分析的染料染色。
Cy3 azide（最大激发波长：555nm 最大发射波长：570 nm）
Cy5 azide（最大激发波长：646nm最大发射波长：662 nm）
| EdU (Component A) | 5 mg |
| Cy5 azide (Component B) | 1 vial |
| DMSO (Component C) | 4 mL |
| 10X EdU reaction buffer (Component D) | 4 mL |
| CuSO4 (100 mM aqueous solution) (Component E) | 1 vial |
| EdU buffer additive (Component F) | 400 mg |
| Hoechst 33342 (10 mg/mL in Water) (Component G) | 35 μL |
存放于-20°C。 保持干燥并避光。 | |
操作简单，所需时间更少，无需变性步骤或苛刻的处理
效率高，亮度高
更好的保护细胞形态，抗原结构和DNA完整性
由于不使用可变的BrdU抗体，因此具有很高的一致性
1）Q：不同货号的EdU可以检测多少个样品？
A：EdU Imaging Kits（货号K1075与K1076）如果用于培养的细胞（6孔板）的检测，可以检测50个样品，每个样品的反应体系为500 μL的cocktail反应液；如果用于12孔、24孔、48孔，96孔，384孔板样品的检测，分别可以检测125、250、350、500、1250个样品，每个样品推荐的反应液用量为200 μL、100 μL、70 μL、50 μL、20 μL；
EdU Imaging Kits（货号K1075与K1076）如果用于冰冻或石蜡切片的检测，可以检测125-250个样品，每个样品的反应体系为100-200 μL的cocktail反应液。
EdU Flow Cytometry Assay Kits（货号K1077与K1078）如果用于流式细胞仪检测，可以检测100个样品，每个细胞样品的细胞数量宜为10-100万，每个样品的反应体系为500 μL的cocktail反应液。
2）Q：EdU可否用于动物体内注射？
A：EdU可以通过注射或进食等方式进行动物的体内标记。如以小鼠为例，可以按照10-200 mg/kg的用量，用PBS配制成一定浓度的EdU，腹腔注射、特定组织或器官局部注射或者加入饮用水中，4小时后或根据特定实验确定的适当时间后，快速处死小鼠，取出所需的组织，按照常规步骤制作冰冻切片或石蜡切片。具体用量跟所用动物的种类、体重和使用方式有关。
3）Q：能否在活细胞中进行Click EdU检测？
A：不可以。Click反应体系中的叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型，检测EdU信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。
4）Q：Cy3与Cy5有什么区别？
A：荧光基团不同，检测时发射荧光的颜色不同（Cy3 azide最大激发波长555 nm， 最大发射波长570 nm；Cy5 azide最大激发波长646 nm，最大激发波长662 nm），两者的实验效果相同，可根据个人需求进行选择。
5）Q：样本检测不到EdU阳性信号？
A：可能原因及解决方案如下：
a) 所用试剂可能变质，不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液；
b) 确保样本发生增殖，可设置阳性对照以确认染色过程无误；
c) EdU处理时间太短，细胞实验一般EdU处理时间宜为细胞周期长度的1/5-1/10，阳性率约为20%-30%，动物实验一般根据目的组织细胞的增殖速度进行时间调整，若细胞增殖速度慢，可延长EdU处理时间；
d) 染色过程干片、固定和通透不充分等因素，实验操作要严谨。
6）Q：样本背景信号很强应该怎么处理？
A：可能原因包括：染色后洗涤不充分，可增加洗涤次数；染色过程中干片导致染料粘附严重；多聚甲醛固定时间过长；没有阳性信号而曝光过度导致背景严重等等，同时可以设置对照组（无染料或无Click反应）排除自发荧光干扰。
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