抑制活性

运用均相时间分辨荧光测定法，使用重组表位标签激酶结构域（JAK1、837-1142；JAK2、828-1132；JAK3、718-1124；Tyk2、873-1187）或全长酶（cMET和Chk2 ）和肽底物进行酶活性测定。在使用或不使用Baricitinib（LY3009104、INCB028050）（11点稀释）的条件下，JAK、cMET或Chk2酶、500 nM（对于Chk2为100 nM）肽、ATP（对于每种激酶特异性的Km或1 mM）和2.0％DMSO的缓冲液中进行酶活性反应。计算的IC50值是抑制50％的荧光信号所需的Baricitinib（LY3009104，INCB028050）浓度。在200 nM时使用标准条件在Cerep进行另外的激酶测定。测试的酶包括：Abl、Akt1、AurA、AurB、CDC2、CDK2、CDK4、CHK2、c-kit、EGFR、EphB4、ERK1、ERK2、FLT-1、HER2、IGF1R、IKKa、IKKb、JNK1、Lck、MEK1、p38a、p70S6K、PKA、PKCa、Src和ZAP70。

细胞系

Human PBMCs，PHA刺激的T细胞

制备方法

该化合物在DMSO中的溶解度大于10 mM。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月

反应条件

10、100、1000、10000 nM，48 h.

实验结果

在PBMC中，INCB028050抑制由IL-6刺激的STAT3磷酸化和趋化因子MCP-1的生成，IC50值分别为44和40 nM。在分离的幼稚T细胞中，INCB028050抑制STAT3磷酸化，IC50值为20 nM，抑制IL-17和IL-22的生成，IC50值为50 nM。

动物模型

雌性大鼠，佐剂诱导的关节炎大鼠，牛II型胶原诱导的DBA/1J关节炎小鼠

给药剂量

雌性大鼠：10 mg/kg，24小时，口服灌胃。Adjuvant诱导的关节炎大鼠：1、3或10 mg/kg；每日一次，2周，口服；胶原诱导的关节炎（CIA）模型：1、3或10 mg/kg，每日两次，共15天，口服。

制备方法

悬浮在0.5％甲基纤维素中，口服，10 ml/kg。

实验结果

在雌性大鼠中，10 mg/kg 的INCB028050抑制大于等于50％的JAK1/2信号传导持续8小时。在佐剂诱导的大鼠关节炎中，1、3或10 mg/kg的INCB028050分别将疾病得分降低24％、57％和81％，并抑制50％、大于95％和大于95％的后爪体积的增加。 此外，INCB028050减少骨吸收。在CIA小鼠模型中，1、3或10 mg/kg的INCB028050分别将临床得分降低19％、67％和61％，并抑制IL-6和IL-23信号传导和功能。

注意事项

请测试所有化合物在室内的溶解度，实际溶解度和理论值可能略有不同。这是由实验系统的误差引起的，属于正常现象。

References:

[1]. Fridman JS, Scherle PA, Collins R, et al. Selective inhibition of JAK1 and JAK2 is efficacious in rodent models of arthritis: preclinical characterization of INCB028050. J Immunol, 2010, 184(9): 5298-5307.