JC-1 (CBIC2) is an ideal fluorescent probe widely used to detect mitochondrial membrane potential. JC-1 accumulates in mitochondria in a potential dependent manner and can be used to detect the membrane potential of cells, tissues or purified mitochondria. In normal mitochondria, JC-1 aggregates in the mitochondrial matrix to form a polymer, which emits strong red fluorescence (Ex=585nm, Em=590nm); When the mitochondrial membrane potential is low, JC-1 cannot aggregate in the matrix of mitochondria and produce green fluorescence (ex=514nm, em=529nm)^[1].

JC-1 染色液的配制
1.1 制备储存液
用 DMSO 配制 5 mg/mL 的 JC-1。如用 1 mL DMSO 溶解 5 mg JC-1。
注：1) JC-1 储存液建议分装后于 -20℃ 或 -80℃ 避光保存。
1.2 工作液的配制
用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液，配制成 1-20 μg/mL 的 JC-1 工作液。
注：1) 请根据实际情况调整 JC-1 工作液浓度，且现用现配。
2) 如果 JC-1 进入细胞的效果不好，可向工作也液中加入适量 20% Pluronic F127 溶液，终浓度为 0.02-0.05%，Pluronic F127 可以防止 JC-1 在缓冲液中聚合并帮助其进入细胞。
JC-1染色
1) 以6孔板为例进行细胞铺板，密度为 5×10⁵cells/mL。37℃，5% CO₂培养箱培养过夜。
注：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过 1×10⁶/mL，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。
2) 取 0.5 mL 细胞悬液至无菌的离心管内。
3) 400 g 离心 3-5 min；弃上清。
4) 用 1 mL JC-1 工作液重悬细胞，于 37℃，5% CO₂培养箱孵育 15-30 min。
5) 室温条件 400 g 离心 5 min；吸掉上清。
6) 用 2 mL 细胞培养液或者缓冲液重悬细胞，之后室温条件 400 g 离心 5 min；弃上清，重复两次。
7) 用 1 mL 新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞，立刻进行后续的流式分析或荧光显微镜观察。
8) 数据分析 (流式细胞仪) ：含有红色 JC-1 聚集物的健康细胞线粒体用 FL2 通道检测；含有绿色 JC-1 单体的凋亡或不健康细胞用 FL1 (FITC) 通道检测。
注：若用于酶标仪检测，用 300 μL 缓冲液重悬细胞；然后按照每孔 100 μL 的量将染色好的细胞转移到不透光的 96 孔板内，即可进行荧光酶标板分析。

652.23

Solid

C₂₅H₂₇Cl₄IN₄

3520-43-2

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

4°C, sealed storage, away from moisture and light

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)

DMSO : 5 mg/mL(7.67 mM;ultrasonic and warming and heat to 60℃)

H₂O :< 0.1 mg/mL(insoluble)

请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限：-80℃, 6 months; -20℃, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)。-80℃ 储存时，请在 6 个月内使用，-20℃ 储存时，请在 1 个月内使用。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。以下溶解方案都请先按照In Vitro方式配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂：

——为保证实验结果的可靠性，澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用； 以下溶剂前显示的百
分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶

• 1.

  请依序添加每种溶剂： 10% DMSO    40%PEG300   5%Tween-80   45% saline

  Solubility: 1.25 mg/mL (1.92 mM); Suspended solution; Need ultrasonic

  此方案可获得 1.25 mg/mL (1.92 mM) 的均匀悬浊液，悬浊液可用于口服和腹腔注射。

  以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 12.5 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀；然后继续加入 450 μL生理盐水定容至 1 mL。

  将 0.9 g 氯化钠，完全溶解于 100 mL ddH2O 中，得到澄清透明的生理盐水溶液
• 2.

  请依序添加每种溶剂： 10% DMSO    90% (20%SBE-β-CDin saline)

  Solubility: 1.25 mg/mL (1.92 mM); Suspended solution; Need ultrasonic

  此方案可获得 1.25 mg/mL (1.92 mM) 的均匀悬浊液，悬浊液可用于口服和腹腔注射。

  以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 12.5 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液中，混合均匀。

  将 2 g 磺丁基醚 β-环糊精加入 5 mL 生理盐水中，再用生理盐水定容至 10 mL，完全溶解，澄清透明

• 
  Description: JC-1 (CBIC2) can be used to analyze mitochondrial membrane (Red and green fluorescence represented the aggregate and monomeric form of JC-1, respectively).
  Method: For cell staining.
  1. Cells are cultured in 24 well plate for 24 hours.
  2. Discard culture medium and incubate cells with JC-1 (20 min; 37℃; dark).
  3. Wash staining cells with HBSS, and the cell morphology is observed under a fluorescence microscope (Invitrogen EVOS M5000, USA).
• 
  Description: JC-1 (CBIC2) can be used to measure mitochondrial membrane potential (Red and green fluorescence represented the aggregate and monomeric form of JC-1, respectively).
• 
  Description: JC-1 (CBIC2) can be used to measure mitochondrial membrane potential (Red and green fluorescence represented the aggregate and monomeric form of JC-1, respectively).
  Method: For cell staining.
  1. Incubate cultured cells with JC-1 (5 μg/mL; 20 min; dark).
  2. Observe fluorescence by flow cytometry (BD FACSCanto II) and the fluorescent color of the cells is observed with a fluorescence microscope (Axio Observer, Germany),respectively.
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  Description: JC-1 (CBIC2) can be used to measure mitochondrial membrane potential (Red and green fluorescence represented the aggregate and monomeric form of JC-1, respectively).
  Method: For cell staining.
  1. Incubate cells with JC-1 (0.5 mL; 5 mg/mL; 20 min; 37℃ ) in a CO₂incubator.
  2. Wash cells for twice with 0.02 M PBS and analyze by a laser confocal microscope (Leica TCS SP8, 124 Germany) and a flow cytometer (Aira II, USA).
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  Description: JC-1 (CBIC2) can be used to measure mitochondrial membrane potential (Red and green fluorescence represented the aggregate and monomeric form of JC-1, respectively).
  Method: For cell staining.
  1. Incubate cells with JC-1 (20 min; 37℃ ).
  2. Wash cells for three times with PBS before imaging and use a confocal laser scanning microscopy for fluorescent images capture and intensity analysis.