Rhodamine dyes are membrane-permeable cationic fluorescent probes that specifically recognize mitochondrial membrane potentials, thereby attaching to mitochondria and producing bright fluorescence, and at certain concentrations, rhodamine dyes have low toxicity to cells, so they are commonly used to detect mitochondria in animal cells, plant cells, andmicroorganisms^[1].

1.TMRE 工作液的配制
1.1 制备储存液
用 525 μL 无水 DMSO 稀释 1 mg TMRE 去配制 5 mM 的储备液。
1.2 工作液的配制
用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液，配制成 1-20 μM 的 TMRE 工作液。
注：请根据实际情况调整 TMRE 工作液浓度，且现用现配。
2. 细胞染色(悬浮细胞)
2.1 离心收集细胞，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。细胞密度在1×10⁶/mL。
2.2 加入 1 mL TMRE 工作液，室温孵育 30-60 分钟。
2.3 400 g，离心 3-4 分钟，弃去上清。
2.4 加入 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。
2.5 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。
3. 细胞染色(贴壁细胞)
3.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
3.2 从培养基中移出盖玻片，吸除多余培养基。
3.3 加入 100 μL 染料工作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，孵育 5-30 分钟。
3.4 吸去染料工作液，用培养基洗 2-3 次，每次 5 分钟 ，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。

514.95

Solid

C₂₆H₂₇ClN₂O₇

115532-52-0

四甲基罗丹明乙酯

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

4°C, sealed storage, away from moisture and light

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)

DMSO : 27.78 mg/mL(53.95 mM;Need ultrasonic)

请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限：-80℃, 6 months; -20℃, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)。-80℃ 储存时，请在 6 个月内使用，-20℃ 储存时，请在 1 个月内使用。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。以下溶解方案都请先按照In Vitro方式配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂：

——为保证实验结果的可靠性，澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用； 以下溶剂前显示的百
分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶

• 1.

  请依序添加每种溶剂： 10% DMSO    40%PEG300   5%Tween-80   45% saline

  Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (4.04 mM); Clear solution

  此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL (4.04 mM，饱和度未知) 的澄清溶液。

  以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀；然后继续加入 450 μL生理盐水定容至 1 mL。

  将 0.9 g 氯化钠，完全溶解于 100 mL ddH2O 中，得到澄清透明的生理盐水溶液
• 2.

  请依序添加每种溶剂： 10% DMSO    90% (20%SBE-β-CDin saline)

  Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (4.04 mM); Clear solution

  此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL (4.04 mM，饱和度未知) 的澄清溶液。

  以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液中，混合均匀。

  将 2 g 磺丁基醚 β-环糊精加入 5 mL 生理盐水中，再用生理盐水定容至 10 mL，完全溶解，澄清透明

• 
  Description: TMRE is a mitochondria specific dye with red fluorescence.
  Method: For mitochondria staining.
  1. Cells are seeded and pretreated with drug in a 24-well plate for 24 h.
  2. The mixture fluorescence dyes including TMRE and other dye are added to each well. Cells are stained for 30 min at 37℃.
  3. The images are captured under a ImageXpress Micro Confocal High-Content Imaging System (Molecular Devices, San Jose, CA, USA).
• 
  Description: TMRE can be used as an fluorescent probe for detecting mitochondrial membrane potential with red fluorescence.
  Method: For measurement of cellular mitochondrial membrane potential level.
  1. After exposure, cells are washed with hot PBS.
  2. Incubate cells with Hoechst 33,342 (1 mM) and TMRE (100 nM) co-staining dyes at 37℃ for 30 min.
  3. Wash cells for twice to completely remove the fluorescent probe.
  4. Use the ImageXpress Micro Confocal High-Content Imaging System (Molecular Devices, San Jose, CA, USA) for image.
• 
  Description: TMRE can be used as an fluorescent probe for detecting mitochondrial membrane potential and morphology with red fluorescence.
  Method: For measurement of mitochondrial membrane potential.
  1. Cells are stained with TMRE (100 nM/L; 20 min; 37℃) in a CO₂incubator.
  2. Fluorescence intensity of cells is evaluated by fluorescence-activated cell sorting. Use a confocal laser scanning microscopy for image.