测定原理:
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在585nm 处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、甲苯和蒸馏水
试剂组成和配制:(50T/24样)
提取液 液体100ml×1 瓶,4°C保存
试剂一 液体10ml×1 瓶,4°C保存
试剂二 液体10ml×1 瓶,4°C保存
试剂三 液体10ml×1 瓶,4°C保存
试剂四 液体20ml×1 瓶,4°C避光保存
粗酶液样本提取:
按组织质量(g):提取液体积(ml)=1:9 的比例加入试剂一(如 0.1g 组织加入 0.9ml 提取液),冰水浴匀浆,10000rpm/min,离心 10min,取上清待测。