测定原理:
酸性条件下,柠檬酸还原 Cr6+生成 Cr3+,Cr3+在 545nm 处有特征吸收峰;通过测定 545nm吸光值的增加,即可计算出样品中柠檬酸含量。
自备实验用品及仪器:
水浴锅、低温离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4°C 保存;
试剂二:液体×1 瓶,4°C 保存;
试剂三:液体×1 支,-20°C 保存;
试剂四:粉剂×1 瓶,室温保存;临用前加入 5ml 试剂一,充分溶解;
试剂五:液体×1 瓶,4°C 避光保存;
标准品:液体×1 支,250μmol/L 柠檬酸标准液,4°C 保存。
柠檬酸提取:
样本提取详见试剂盒内说明书。测定组织和细胞需要另取组织测定蛋白浓度。
测定操作表:
试剂名称 | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
蒸馏水(μl) | 100 |
|
|
标准液(μl) |
| 100 |
|
上清液(μl) |
|
| 100 |
试剂一(μl) | 700 | 700 | 700 |
试剂四(μl) | 100 | 100 | 100 |
试剂五(μl) | 100 | 100 | 100 |
混匀,室温静置 30min,1ml 玻璃比色皿,545nm,蒸馏水调零,测定各管 A545。