试剂仪器设备原料
银牌会员第4
访问量: 1130448   网址: hydranal.cnreagent.com    在线留言 
产品搜索
检测试剂盒 >> 生化试剂盒
离子结合性果胶(ISP)含量检测试剂盒(微量法)
离子结合性果胶(ISP)含量检测试剂盒(微量法)图片
包装: 100管/48样
索取资料及报价
产品介绍

果胶(Pectin)是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,对细胞起着软化和黏合作用。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联,通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶,如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。

利用带有螯合剂的酸性提取液提取离子结合型果胶(ISP),其在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸,后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物,生成物质在530nm处有最大吸收峰。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容:

试剂名称规格保存条件
提取液一液体200ml×1瓶(自备)2-8℃
提取液二液体50ml×1瓶2-8℃
提取液三液体70ml×1瓶2-8℃
试剂一液体30ml×1瓶(自备)2-8℃
试剂二液体3ml×1瓶2-8℃
试剂三液体5ml×1瓶2-8℃
标准品粉剂×1支2-8℃

溶液的配制:

1.提取液一:80%乙醇,自备。即将80ml无水乙醇和20ml蒸馏水混合。提供一个125ml空瓶。

2.试剂一:浓硫酸30ml,自备。

3.标准品:10mg半乳糖醛酸。临用前加入0.943ml提取液三,配成50μmol/ml的标准液。

技术指标:

最低检出限:0.0946μmol/ml

线性范围:0.1-2μmol/ml

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1.取约0.1g样本,加入1ml提取液一,室温快速匀浆,95℃水浴20min,冷却至室温,4000g 25℃离心10min,弃上清。沉淀加入1.5ml提取液一和丙酮交替各洗2遍(涡旋振荡2min左右,4000g 25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1ml提取液二(去除淀粉)浸泡15小时,4000g 25℃离心10min,弃上清,加入1ml提取液三,充分匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清液待测。

二、测定操作

1.分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至530nm,分光光度计蒸馏水调零。

2.将50μmol/ml标准液用提取液三稀释为2、1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/ml的标准溶液备用。

3.操作表:

试剂名称(μL)空白管标准管对照管测定管
样本--2525
标准品-25--
蒸馏水25---
试剂一200200200200
混匀、90℃放置10min,取出后冷却



试剂二--25-
试剂三2525-25
混匀,25℃静置30min后吸取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中测定530nm处吸光值,分别记为A空白管、A标准管、A对照管和A测定管。ΔA标准=A标准管-A空白管,ΔA测定=A测定管-A对照管。



三、离子结合型果胶含量的计算

1.标准曲线的绘制:以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程得到x(μmol/ml)。

2.离子结合型果胶含量的计算:离子结合型果胶含量(μmol/g质量)=x×V提取液三÷W =x÷W

V提取液三:加入提取液三的体积,1ml;W:样本质量,g。

注意事项:

1.浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。建议每次实验冷却时间保持一致。

2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

相关产品
我要咨询 关闭
  •      
  • 姓名* 
  • 电话* 
  • 单位* 
  • email 
  • 留言内容*
  • 验证码*  
  • 让更多商家关注