超氧化物歧化酶对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用。此酶能清除超氧阴离子自由基,保护细胞免受损伤,本试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定SOD活力。可测血清(浆)、脑脊液、胸水、腹水、肾透析液、尿液、精液、红细胞、白细胞、血小板、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、各种动植物组织细胞、及亚细胞水平(线粒体、微粒体)中的SOD活力,并可检测微生物、药物、食品、饮料、化妆品中的SOD活力。既可测总SOD又可测锰-SOD及铜锌-SOD。
检测原理:
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基(O2-),后者氧化羟胺形成亚硝酸盐,在显色剂的作用下呈现紫红色,用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含 SOD 时,则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用,使形成的亚硝酸盐减少,比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值,通过公式计算可求出被测样品中的 SOD 活力。高等动物细胞内只有二种 SOD 即铜锌-SOD(CuZn-SOD)与锰-SOD(Mn-SOD),二者相加等于总 SOD(T-SOD),经样本前处理过的样本中 Mn-SOD 活力丧失,但 CuZn-SOD 活力不变。
产品优点如下:
1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。
2、取样量微:本法取手指或耳垂等末梢血20l~50l即可测红细胞中的SOD,只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD,只需5mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD、0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。
3、灵敏度高:IC50=0.05g/ml,是邻苯三酚法的18倍。
4、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
5、再现性好:变异系数CV=1.7%。
6、回收试验: X =103.3%。
7、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
8、测试面广:可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等,效果均佳。
仪器:
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为550nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
样本收集与前处理:
血清(浆)可直接测定。
红细胞:需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
培养细胞、细菌、植物组织:常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程:
1、按步骤加入样本和试剂
2、漩涡混匀,37℃孵育40分钟
3、加入显色剂显色,室温静置10分钟
4、550nm波长,1cm光径,比色