反应原理:
细胞膜上的NADPH氧化酶被激活,将还原型辅酶II(NADPH)转变为氧化型辅酶II(NADP+),氧分子则获得电子形成超氧阴离子O2-,由O2-又可生成H2O2和OH-。其超氧阴离子产物具有杀死微生物的功能。NADPH氧化酶异常将导致慢性肉芽肿病(Chronic Granulomatous Disease;CGD)。
基于底物还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH),在特异性抑制剂联苯基三价碘(diphenyleneiodonium;DPI)的存在下,受到NADPH氧化酶的催化作用,转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+),产生吸光峰值的变化,通过分光光度仪(340nm波长)检测,来测定NADPH氧化酶的特异活性。
试剂组成:
清理液(Reagent A) 30 毫升
裂解液(Reagent B) 5 毫升
缓冲液(Reagent C) 20 毫升
反应液(Reagent D) 2.5 毫升
阴性液(Reagent E) 2 毫升
底物液(Reagent F) 500 微升
专性液(Reagent G) 200 微升
保存方式:
保存清理液(Reagent A)和阴性液(Reagent E)在 4°C冰箱里,其余的保存在-20°C冰箱里,避免反复冻融;反应液(Reagent D)和底物液(Reagent F),避免光照,有效保证 6 月
用户自备:
15 毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
1.5 毫升离心管:用于样品操作和保存的容器
4°C(微型)台式离心机:用于样品处理
DOUNCE 匀浆器:用于裂解组织细胞
恒温培养箱或恒温水槽:用于反应物孵育
比色皿:用于光度测定的容器
分光光度仪:用于光度分析