测定原理:
Cys 还原磷钨酸生成钨蓝,在600nm 处有吸收峰;通过600nm 吸光度,计算Cys 含量。
仪器设备及需自备试剂:
可见光分光光度计、低温离心机、微量移液枪、磷酸和蒸馏水
试剂组成:(50T/48 样)
试剂一:液体×1 瓶,4°C保存。
试剂二:液体×1 瓶,4°C保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4°C保存。提前一天向试剂三中加5ml蒸馏水充分溶解,再加磷酸1.25ml,
混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴2h;冷却后加20ml蒸馏水,4°C保存2周。
标准品:1μmol/ml 标准液×1 瓶,4°C保存。
操作步骤:
1、半胱氨酸提取:
样本提取详见试剂盒内说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。
2、操作表:
试剂名称 | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
双蒸水(μl) | 100 |
|
|
标准液(μl) |
| 100 |
|
样 本(μl) |
|
| 100 |
试剂二(μl) | 500 | 500 | 500 |
试剂三(μl) | 500 | 500 | 500 |
混匀,室温静置15min,波长600nm,双蒸水调零, 测定管各管吸光度值。